格尔德霉素衍生物G0705的抗肿瘤作用及分子机制

目的格尔德霉素(Geldanamycin)属于苯醌胺莎类抗生素,其作用靶点为热休克蛋白90(Heat Shock Protein HSP90),细胞水平实验表明格尔德霉素对肿瘤细胞有明显的杀伤作用,但动物实验中发现格尔德霉素具有肝毒性,而且水溶性很差。这些问题限制了格尔德霉素在动物实验的疗效。近年来,寻找溶解性好、肝脏毒性低的格尔德霉素衍生物成为新的研究热点。其中17-AAG和17-DMAG已经开始进行Ⅰ、Ⅱ期临床实验。G0705为本实验室合成的格尔德霉素衍生物。本实验研究了G0705对乳腺癌MCF -7细胞株的抗细胞增殖作用、诱导细胞凋亡作用及其对HSP90下游相关靶点及其下游信号分子的影响。方法采用MTT法测定G0705对乳腺癌MCF-7细胞的抗增殖作用。用Hoechst33258染色法、Hoechst-PI双染色法、活细胞Annexin-FITC/PI双染法测定G0705诱导MCF-7细胞早期凋亡作用。用Western blot测定G0705对MCF-7细胞中HSP90下游相关靶点及其下游信号分子的影响。结果MTT法测定G0705抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的IC_(50)值为13.6μg/ml。Hoechst33258染色法、Hoechst-PI双染色法结果表明,使用G0705不同浓度0.0001mg/ml、0.001mg/ml、0.01mg/ml,细胞凋亡数量随浓度增高而明显增加,且呈剂量依赖性。活细胞Annexin-FITC/PI双染法检测表明,G0705浓度0.01mg/ml在给药24h后细胞早期凋亡率为7.79%,48h后细胞早期凋亡率35.85%,对照组则分别为2.44%和5.88%。与对照组相比G0705诱导MCF-7细胞的凋亡作用明显。Western blot法的结果表明,G0705不同浓度0.0001mg/ml、0.001 mg/ ml、0.01mg/ml,在给药48h后AKT、RAF-1、EGFR、HER-2等的蛋白水平均有明显降低,且呈剂量依赖性。结论实验结果显示G0705对乳腺癌MCF-7细胞有一定的增殖抑制作用。G0705可诱导MCF-7细胞凋亡,其诱导的细胞凋亡作用呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性。G0705对MCF-7细胞中AKT、RAF-1、EGFR、HER-2等靶点蛋白表达水平有明显的抑制作用。