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血小板生成素突变体的克隆和扩增及其融合蛋白在大肠杆菌中高效表达的研究 被引量:1

High expression of human thrombopoietin mutant fusion protein in E.coli
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摘要 目的:通过获得编码血小板生成素(Tpo)成熟肽N端1~196个氨基酸的突变体cDNA在大肠杆菌JM109中的表达,为Tpo进一步的结构和功能研究提供材料来源。方法:用多聚酶链反应(PCR)及DNA重组技术,将PCR产物克隆到pUC19载体并测序,然后克隆到表达载体pMAL-c2上。结果:转化重组质粒pMAL-MBP/TpoM的大肠杆菌经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导4~5小时,SDS-PAGE分析显示融合蛋白(MBP/TpoM)的分子量约为6.3万。薄层扫描分析表明该蛋白占菌体总蛋白量的37%。结论:经PCR方法扩增的Tpo基因突变体可在大肠杆菌中高效表达,为Tpo突变体的进一步结构和功能研究以及Tpo抗体的制备打下了基础。 Objective:To obtain human thrombopoietin (Tpo)mutant cDNA encoding mature peptide N terminal 1~196 amino acids and investigate its expression in E.coli JM109.Methods:Polymerase chain reaction and DNA recombination techniques were employed.PCR product was inserted into pUC19 vector and sequenced and then cloned into expression vector pMALc2.Results:E.coli JM109 cells with plasmid pMAL MBP/TpoM were induced by IPTG for 4~5 hours.SDSPAGE analysis showed that MBP/TpoM molecular weight is about 63000.Scanning analysis indicated that expressed protein accounts up to 37% of total E.coli proteins.Conclusion:The Tpo mutant of interest is successfully expressed in E.coli JM109 cells.
出处 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第12期634-637,共4页 Chinese Journal of Hematology
关键词 血小板生成素 突变体 融合蛋白 基因表达 Thrombopoietin Mutant Fusion protein Gene expression
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参考文献1

  • 1田生礼,中华微生物学和免疫学杂志,1996年,16卷,258页

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引证文献1

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