用线性载体稳定转染P815细胞的脂质体转染方法的优化

Optimization of liposome mediated transfection with P815 cells

目的:提高用线性载体进行的稳定转染哺乳动物细胞的脂质体转染方法的转染效率及转染稳定性。方法:将pcDNA3/GFP载体线性化,对复苏24h的P815细胞(10%铺满培养板板底)在96孔板上进行转染,优化DNA、脂质体的用量以及G418筛选浓度,设立复苏后培养1周的P815细胞(80%铺满培养板板底)在6孔板上进行常规转染条件的对照。用共聚焦荧光显微镜和流式细胞术检测阳性克隆。结果:采用优化的方法可将用线性化的pcDNA3/GFP质粒稳定转染P815细胞的实验周期由2个月缩短为2周,转染细胞株中GFP+细胞的比例、GFP的荧光强度、转染细胞的稳定性均显著高于常规方法所获得的转染细胞。结论:改进的脂质体转染方法能显著提高用线性载体进行的细胞转染的效率和稳定性,并能显著缩短实验周期。