濒危植物巴东木莲ISSR分子标记技术体系的建立

利用正交设计建立和优化适合于濒危植物巴东木莲的ISSR-PCR分子标记技术体系。对影响ISSR-PCR反应的多个因素,包括引物和DNA模板浓度、Taq酶用量、Mg2+和dNTPs浓度以及PCR扩增的退火温度、退火时间及循环次数等进行了优化。结果表明,适于巴东木莲ISSR-PCR反应的分子标记技术体系为:反应总体积20μl,含2μl 10×buffer、1μl 20 mmol/L MgCl2、4μl 2μmol/L引物、0.4μl 10 mmol/L dNTPs、0.8μl 5 U/μlTaq酶及40 ng模板DNA;PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,54℃复性45 s,72℃延伸1.5min,35个循环,最后72℃延伸7 min。本研究建立的ISSR分子标记技术体系稳定性强,重复性高。