小鼠几丁质酶的重组表达和抗体制备

目的:检测脂多糖(LPS)刺激成骨细胞后,几丁质酶(chitotriosidase)基因表达变化情况。进行小鼠chitotriosi-dase的原核和真核表达,并利用原核表达纯化的蛋白,制备兔抗鼠多克隆抗体。方法:用LPS刺激MC3T3-E1细胞,提取mRNA,通过RT-PCR获得小鼠chitotriosidase的编码区全长序列,克隆进pRSET A载体,转化BL21菌株,IPTG诱导表达。获得的包涵体蛋白用镍柱纯化后,作为抗原免疫兔子,制备多克隆抗体。用该抗体检测真核表达的小鼠chitotriosi-dase蛋白,并确定抗体的灵敏度和特异性。结果:LPS明显刺激chitotriosidase表达。原核表达的包涵体蛋白经镍柱纯化后也能制备出效果较好的多克隆抗体。结论:成功地克隆表达了小鼠的chitotriosidase蛋白,并制备出高灵敏度、高特异性的多克隆抗体,为进一步阐明chitotriosidase在病理条件下的表达变化和功能提供了一条途径。