微管相关蛋白I轻链3(LC3)的基因表达及单克隆抗体制备

目的克隆LC3基因,体外表达后制备抗LC3单克隆抗体,为自噬研究提供相关实验材料。方法RT-PCR方法从RAW264.7细胞基因组中克隆LC3基因,连接至pQE80L原核表达载体后转化E.coli DH5(进行诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定表达蛋白。蛋白纯化后免疫BALB/C小鼠制备LC3抗单克隆抗体。结果克隆了LC3基因,并对其在E.coli DH5(进行诱导表达,SDS-PAGE分析表明在相对分子质量Mr为20×103有特异条带,Western blot结果证明表达产物具有一定的生物学活性。表达蛋白免疫小鼠后获得了能分泌抗LC3蛋白的杂交瘤细胞株。结论:在E.coli中对LC3进行表达,并制备抗蛋白的单克隆抗体,为自噬研究提供了有力实验工具。