RNA干扰人脐静脉血管内皮细胞组织因子基因表达

目的利用RNA干扰技术沉默脐静脉内皮细胞中组织因子基因,实现瞬时沉默,为进行组织因子(TF)表达干扰的体内试验进行探索。方法设立3种处理方法:①空白未干扰;②假干扰;③RNA干扰,每种实验方法各有3个样本。将合成的人组织因子基因(NM_001993)干扰片段shRNA序列,扩增、提取、测序正确后,转染至人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),分别对3种处理方法后TF基因沉默前后mRNA的表达采用Gel-Pro Analyzer软件进行区带灰度值扫描并分析、TF蛋白水平的表达采用免疫荧光检查进行观察。结果shRNA转染到HUVECs后TFmRNA的表达处理间差异显著,F=27.657,P=0.001,未干扰和假干扰之间没有显著性差异(P=0.103,>0.05),未干扰和干扰之间(P=0.000,<0.05)有显著性差异。空白未干扰TF免疫荧光检测呈现"满天星"的表现,在阴性对照组荧光染色略有减少,在RNA干扰组TF蛋白表达明显减少。结论HUVECs中TF的表达被所构建的pENTRTM/U6-TF-shRNA载体明显抑制,有可能成为未来出凝血及其它疾病的新的治疗手段之一。