采用正交设计方法优化梨ISSR-PCR反应体系

Optimizing ISSR-PCR System of Pear by Orthogonal Design

采用正交设计的方法对梨ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq DNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物的浓度)在4水平上进行优化试验,PCR结果用DPS数据处理软件分析,建立的梨ISSR-PCR的最佳反应体系(20μL)为:Taq DNA聚合酶1.0U、Mg2+的浓度2.0 mmol·L-1、模板DNA 10～80 ng、dNTPs 0.10 mmol·L-1、引物0.3μmol·L-1。对梨ISSR-PCR最佳反应体系进行了梯度退火试验,得到的最佳退火温度为55℃。

In this paper, the orthogonal design was used to optimize ISSR-PCR amplification system on pear in four levels of five factors （Taq DNA polymerase, Mg^2＋,DNA template,dNTP,and primer） respectively. The resuh of PCR was analyzed by software DPS, and the most suitable ISSR-PCR system for pear was established,it＇s 20μL reaction system contained 1.0U Taq DNA polymerase,2.0 mmol·L^-1 Mg^2＋,10-80ng DNA template, 0.10 mmol·L^-1 dNTPs, 0.3 μmol·L^-1 primer. The optimal annealing temperature for ISSR-PCR reaction was 55℃ proposed by gradient PCR.