以反相离子对HPLC法同时测定大鼠内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶

目的建立测定血清中内源性嘧啶类物质尿嘧啶(U)及二氢尿嘧啶(UH2)的反相离子对HPLC方法。方法:实验动物血清用5%高氯酸一步沉淀蛋白,分离并通过微孔滤膜后进样。色谱柱为迪马C18色谱柱(250mm×4.6mm),柱温10℃;流动相为含磷酸根0.03mol/L、含庚烷磺酸钠0.03mol/L及含6%甲醇的缓冲液(pH=3.0),流速0.5ml/min。检测波长210nm,灵敏度为0.1AUFS。结果本文色谱条件可很好地分离尿嘧啶(U)及二氢尿嘧啶(UH2)。测定10只不同年龄不同性别来自不同实验动物中心的动物具有不同的U/UH2比值。结论以反相离子对HPLC法可精密测定大鼠内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶的比值。