枸杞属RAPD反应体系优化

以枸杞属植物为材料,进行RAPD反应体系的优化。结果表明,在25μl总反应体系中,以DNA模板量为30 ng,引物0.6μmol/L,dNTP150μmol/L,Mg2+2.5 mmol/L,TaqDNA聚合酶0.75 U,10×反应缓冲液2.5μl为最优反应条件。PCR的反应程序为:94℃预变性2 min,94℃变性20 s,36℃退火30 s,72℃延伸1 min,5个循环;94℃变性20 s,40℃退火30 s,72℃延伸1 min,40个循环;72℃延伸10 min。应用优化后的反应体系获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好。