韭菜ISSR-PCR反应体系的优化

通过优化韭菜ISSR-PCR反应的主要参数,确定韭菜ISSR反应体系和扩增条件及引物适宜的退火温度。结果表明,10μL反应体积中,各主要成分的添加剂量分别为:10×Buffer1μL,20ng/μL的模板DNA1μL,0.6mmol/L引物3.3μL,10mmol/L的dNTP0.4μL,25mmol/L的MgCl20.5～0.6μL,2.5U/μL的Taq酶0.2μL,双蒸水3.5～3.6μL。引物适宜的退火温度均高于其Tm值2～4℃。