靶向RhoA基因的shRNA质粒表达载体的构建与鉴定

目的利用pSilencer3.1H1 Hygro载体构建靶向大鼠RhoA基因的shRNA干扰分子表达载体。方法选择RhoA基因上两段序列体外合成RNA干扰分子的正义链和反义链模板序列,经退火成互补双链,与线性化的pSilencer3.0.H1连接、转化大肠杆菌和序列测定,并在大鼠脊髓少突胶质细胞体外培养模型上验证构建的干扰载体的抑制靶基因表达的效果。结果正确构建了针对RhoA基因RNA干扰分子的表达载体,构建的表达RNA干扰分子的表达载体能有效抑制体外培养的少突胶质细胞RhoA蛋白的表达。结论成功构建了针对RhoA基因的shRNA表达质粒,为进一步研究脊髓损伤奠定基础。