人胎肝MSCs的分离培养及其类ESCs特性的研究

The isolation of MSCs from human fetal liver by two-step centrifugation with HES sedimentation and their ESCs-like characterizations

目的:建立一种简便、有效且经济的分离人胎肝间充质干细胞(hFL-MSCs)的方法,在此基础上研究hFL-MSCs的类胚胎干细胞特性。方法:利用二步离心及羟乙基淀粉沉淀法分离hFL-MSCs,根据不同类型细胞对培养瓶的不同黏附特性,通过多次传代纯化得到hFL-MSCs;用流式细胞仪检测hFL-MSCs的细胞周期及表面标志;用免疫细胞化学及RT-PCR检测AKP、hTERT、SSEA-4和Oct-3等胚胎干细胞标志在hFL-MSCs中的表达;在不同条件下,诱导hFL-MSCs向类神经元、成肌细胞及胰岛β样细胞分化并加以鉴定。结果:从人胎肝中分离、纯化得到MSCs,P3代hFL-MSCs有91.2%处于G0/G1期;hFL-MSCs高表达CD29和CD44,不表达造血细胞标志CD34和CD45,极低表达与GVHD相关的HLA-DR、CD80、CD86和CD106;hFL-MSCs表达Oct-4、SSEA-4、AKP和hTERT等胚胎干细胞标志;在不同诱导条件下,hFL-MSCs可分化为类神经元、肌样细胞以及胰岛β样细胞。结论:二步离心联合羟乙基淀粉沉淀法是一种简便、高效且低成本的分离hFL-MSCs的方法;hFL-MSCs具有类胚胎干细胞的特性,体外诱导可向3个胚层来源的细胞分化,且免疫原性弱,是组织工程和细胞治疗较为理想的种子细胞。