摘要
本研究以测序质粒为模板,扩增出结构蛋白基因ORF2a-ORF7,将此基因片段插入真核表达载体pEGFP-N3中构建重组质粒pEGFP-N3-(ORF2a~ORF7),然后将重组表达质粒转染293T细胞。通过荧光显微镜观察显示,重组质粒pEGFP-N3-(ORF2a~ORF7)和载体pEGFP-N3均有绿色荧光出现。SDS-PAGE电泳和western blot分析结果表明重组质粒pEGFP-N3-(ORF2a~ORF7)和载体pEGFP-N3均有EGFP表达;仅ORF7有43ku的融合蛋白EGFP出现,与预期大小相符;其他重组质粒pEGFP-N3-(ORF2a~ORF6)均没有融合蛋白出现。本实验为进一步研究这些蛋白的结构和生物学功能奠定了基础。
In this report, the structural protein genes of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) (ORF2a-ORF7) were PCR amplified and cloned into eukaryotic expressing vector pEGFP-N3. The recombinant plasmid pEGFP- N3-(ORF2a-ORF7) was transfected into 293T cell. Fluorescence microscopy showed that EGFP were expressed in all transfected cells. SDS-PAGE and western-blot indicated that only the ORF7 gene was successfully expressed.
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期85-88,共4页
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2006AA10A204)
国家生猪现代农业产业技术体系,广东省农业类计划项目(2007A020300006-4)