体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1克隆猪

转ω-3脂肪酸去饱和酶基因猪在优质猪培育及研究ω-3不饱和脂肪酸预防心血管和癌症疾病中的作用方面有着重大的应用．本研究首次通过体细胞核移植制备了转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1猪．将sFat—1基因转染到大白猪胎儿成纤维细胞，获得转基因阳性细胞克隆，然后以转基因细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎，胚胎体外培养或进行移植．先后移植了1889枚1-4细胞期克隆胚胎到10头受体母猪的输卵管内，28天B超检测9头受体母猪妊娠（90％），7头妊娠足月（70％）分娩产下21头仔猪，体细胞克隆猪的效率为1．1％（出生仔猪／移植胚胎）．体细胞克隆猪效率的提高，主要是对克隆胚胎的移植环节进行了改进，比较了受体母猪排卵状况对胚胎移植效率的影响．当受体母猪卵泡发育处于即将排卵或正在排卵阶段，能够获得较高的妊娠率和妊娠足月率（100％），而排卵后移植妊娠足月率为0％．对健康存活15头克隆猪进行了PCR和Southern检测，证实13头为转基因猪，转基因阳性率为87％．RT—PCR检测13头转基因猪，12头表达sFat—1基因．以上结果表明，利用优化的体细胞转基因结合核移植技术，可以成功地批量生产转sFat-1基因的克隆猪．