我国脊髓灰质炎Ⅰ型野病毒JX基因型特异RNA探针及其应用

JX GENOTYPE SPECIFIC RNA PROBE FOR CHINA WILD POLIOVIRUSES AND ITS APPLICATION

及时发现脊髓灰质炎（脊灰）野病毒，是消灭脊灰工作中病毒学监测的首要任务。近期我国存在４个脊灰Ⅰ型野病毒基因型，其中Ｐ１／ＣＨＮ－ＪＸ８９和Ｐ１／ＣＨＮ－Ｒ９１为两个主要的流行基因型。在分析了我国大量脊灰野病毒ＶＰ１核酸序列的基础上，选取了１３３８ＪＸ８９病毒ＶＰ１５′端的９６个核苷酸片段（２４８０－２５７５），经ＰＣＲ扩增，克隆至ｐＵＣ／Ｔ７质粒，线性化后，用Ｔ７ＲＮＡ多聚酶制备ＲＮＡ探针，并将Ｄｉｇ标记物渗入探针分子中。经杂交试验，两个主要基因型病毒全部与此探针呈阳性反应，而其它基因型和疫苗相关病毒均为阴性反应，体现了较好的特异性与敏感性，而且实验结果由核酸序列分析等证实。脊灰野毒探针的应用在国际上尚未见报道，它克服了疫苗探针杂交中容易遗漏野毒株的缺点，直接查出野病毒。这对疫苗株中混有少量野毒株的分离物有重要意义。