重组人载脂蛋白E3在毕赤酵母中的分泌表达及鉴定

目的在毕赤酵母中高效表达重组人载脂蛋白E3(rhApoE3),制备与天然hApoE3具有相同结构和活性的rhApoE3。方法用RT-PCR法自人肝组织RNA克隆hApoE3的cDNA,构建真核分泌型表达载体pPICZα/hApoE3。经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X33。甲醇诱导后进行SDS-PAGE、Western印迹分析,筛选高表达工程菌。结果经PCR法克隆的hApoE3DNA序列与GenBank登录的序列一致。SDS-PAGE和Western印迹分析均在分子量约34kD出现特异性条带,rhApoE3表达量达150mg/L。结论在毕赤酵母菌中可经甲醇诱导产生rhApoE3,获得高效表达rhApoE3的毕赤酵母工程菌。