个旧矿粉诱导的支气管上皮转化细胞cDNA消减文库的构建

目的构建永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B与其受个旧矿粉体外诱导的恶性转化细胞之间差异表达的cDNA消减文库。方法以BEAS-2B为对照组，以采自个旧井下作业面的矿粉为染毒物在体外成功诱导的恶性转化细胞为实验组，分别提取总RNA；应用SMARTcDNA合成技术，获得充足的dscDNA；应用抑制性消减杂交（SSH）技术分离BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的基因片段；再通过T／A克隆和蓝白筛选实验，克隆BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的基因片段，构建二者之间差异表达的cDNA消减文库。结果通过SSH和T／A克隆等技术成功构建了具有较高消减效率的BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的cDNA消减文库，文库经扩增后得到107个白色克隆和41个蓝色克隆。结论应用SSH技术成功构建了具有较高消减效率的BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的cDNA消减文库，为进一步研究个旧矿粉致肺癌发生的分子生物学机制奠定了基础。