摘要
采用SDS法和CTAB法提取虎杖的DNA,并比较两种方法的效果,通过单因子试验优化影响虎杖ISSR-PCR的主要参数。结果表明,CTAB法提取的虎杖总DNA质量优于SDS法。虎杖ISSR-PCR的最佳反应体系总体积为25μL,1×PCRreaction buffer[10mmolTris-HCl(pH8.3),50mmolKCl],40ng模板DNA,0.25mmol·L-1dNTPs,2UTaqDNA聚合酶,2.0mmol·L-1MgCl2,1.0μmol·L-1引物。该反应体系适用于应用ISSR标记开展虎杖DNA指纹、遗传多样性等研究。
The genomic DNA of Polygonum cuspidatum was extracted by SDS and CTAB methods respectively. The effects of ISSR-PCR was analyzed and optimized with single factor experiment. According to the quality of extracted DNA,the CTAB method was better than SDS method. The optimized reaction system was as follows: 25 μL PCR reaction system containing 1xPCR reaction buffer [10mmol Tris-HC1 (pH8.3), 50 mmol KCl],40 ng template DNA, 0.25 mmol· L^-1 dNTPs, 2U Taq DNA polymerase,2.0 mmol·L^-1 MgCl2 and 1.0 μmol· L^-1 primer. The ISSR-PCR system is suitable for the study of the Polygonum cuspidatum DNA fingerprint, genetic diversity, etc.
出处
《湖北农业科学》
北大核心
2009年第3期540-543,共4页
Hubei Agricultural Sciences
基金
中南林业科技大学青年科学研究基金项目(06007B)
中南林业科技大学林木遗传育种学科资助项目
关键词
虎杖
ISSR
反应体系
Polygonum cuspidatum
ISSR
reaction system