摘要
目的：脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征，至今无有效的治疗手段。细菌Cp6DNA是引起脓毒症的主要病原分子。CpGDNA通过与TLR9结合，介导单核／巨噬细胞的活化，是介导脓毒症发生的重要途径。本研究以CpGDNA为靶点，从中药中定向分离具有拮抗CpGDNA和治疗脓毒症作用的活性物质。方法：（1）应用生物传感器技术、建立以CpGDNA为靶点的筛选抗炎中药的技术平台并对78种中药进行筛选；（2）利用生物传感器技术、硅胶柱层析、离子交换柱层析技术，从大黄中定向分离与CDGDNA具有较高结合活性的组分，并对得到的组分进行初步的活性评价，确定活性组分；（3）在体外实验中，测定活性组分与CpGDNA、lipidA的结合能力，观察活性组分对LPS、CpGDNA刺激小鼠RAW264．7细胞分泌炎症介质的抑制作用，在体内实验中，观察活性组分对致死剂量热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用。（4）利用反相HPLC技术对活性组分进行制备分离，获得活性单体化合物；（5）在体外实验中，检测单体化合物与CpGDNA和lipidA的结合能力．观察化合物对LPS、CpGDNA刺激小鼠RAW264．7细胞分泌炎症介质的抑制作用。结果：（1）建立了以CpGDNA为靶点应用生物传感器筛选抗炎中药的技术平台；从78种中药中筛选出大黄等14种中药与CpGDNA具有较高结合能力；（2）利用生物传感器技术、硅胶柱层析、离子交换柱层析等技术从大黄水提物中定向分离得到与CpGDNA有较高结合活性大黄D组分；（3）在体外，大黄D组分与CpGDNA、LipidA均具有较高的结合活性，对CpGDNA及LPS刺激小鼠RAW264．7细胞分泌TNF-α有显著的抑制活性，并呈现良好的量一效关系。在体内，大黄D组分对致死剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠有显著的保护作用，并呈现良好的量-效关系；（4）通过反相HPLC从D组分中分离得到单体化合物大黄酸和大黄素；（5）在体外，大黄酸和大黄素与CpGDNA均具有较高结合能力，均能单独或协同对CpGDNA及LPS刺激RAW264．7细胞分泌TNF—Q产生显著抑制作用。结论：（1）应用生物传感器、以病原分子CpG DNA为靶点，成功地建立了筛选抗炎中药的技术平台；（2）从大黄中分离得到与CpGDNA有较高结合活性的大黄D组分，体内、外生物学活性评价结果显示：大黄D组分对CpGDNA及LPS刺激小鼠RAW264．7细胞分泌TNF—α具有显著的抑制活性，并对致死剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠有显著的保护作用；（3）从大黄D组分中分离得到单体化合物大黄酸和大黄素，生物学活性评价结果显示，大黄酸和大黄素对CpGDNA及LPS刺激小鼠RAW264．7细胞分泌TNF—α具有显著的抑制活性，提示大黄酸和大黄素可能是D组分以及大黄提取物拮抗cpGDNA和脓毒症的主要物质基础。
