摘要
目的:在分离制备的大鼠卧脏线粒体上,检验银杏酸(GAs)的损伤作用。方法:银杏酸(6-烃基水杨酸衍生物)从银杏外种皮中通过提取、分离、纯化而制备,并通过液一质联机鉴定。采用其中两个主要单体C13:0(GA13)和C15:1(GA15)进行研究。采用分步差速离心法制备大鼠肝脏线粒体。以线粒体呼吸功能和胞浆及线粒体标志酶(乳酸脱氢酶和柠檬酸合酶)活件来评估线粒体制备质量。采用Clark氧电极法测定线粒体呼吸功能(以RCR和ADP/O值为指标),采用分光光度法测定线粒体通透性孔道开放(mPTP),采用荧光指示剂Rhodamine123测定线粒体膜电位(△ψm),采用MTT法评价线粒体活力。结果:GAs可呈剂量依赖性地抑制线粒体的呼吸功能,并显示对氧化磷酸化有解偶联作用。GA13和GA15可剂量依赖性地诱导mPTP的开放(EC50值分别为2.75μM和3.20μM),且均被mPTP拮抗剂CysA特异性抑制。