Survivin特异性shRNA表达载体的构建及评价

目的构建针对人结肠癌细胞系Lovo的高效率沉默Survivin的shRNA表达载体。方法合成特异性干扰Survivin的小发卡RNA(shRNA)片段,并与pGenesil2载体连接,构建Survivin干扰载体(pGenesil2-Survivin shRNA)。利用脂质体将其转染Lovo细胞,分为正常细胞对照组和3个shRNA干扰组(pGenesil2-Survivin1、2及3),应用荧光显微镜对转染效果进行评价,应用Western印迹和免疫细胞化学法分析转染后Lovo中Survivin的蛋白表达水平。结果插入片段测序结果与合成shRNA结果一致;转染效率可达70%左右,转染pGenesil2-Survivin shRNA后,3个干扰组的Lovo细胞中Survivin蛋白表达水平均较正常对照组显著降低(P<0.01)。结论成功构建了能高效沉默Survivin的RNAi表达载体;且pGenesil2-Survivin高效抑制结肠癌Lovo细胞中Survivin基因表达。