猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测方法的建立与初步应用

Establishment of Antibody Indirect ELISA and its Initial Application

本研究利用原核表达的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为标准抗原蛋白建立PCV2抗体检测方法,同时对建立的检测方法的相关条件进行了优化。通过优化确定抗原的最佳包被浓度为10μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶160,最佳封闭试剂为10%牛血清,二抗的使用浓度为1∶1000,血清及二抗的最佳反应条件为37℃孵育60 min,底物的最佳反应条件为37℃反应10 min,cutoff值为0.25。通过批内及批间重复性的评价,变异系数均小于0.1,表明本检测方法具有较高的可重复性。与标准的检测试剂盒相比,检测临床样本时,本检测方法与对照试剂盒检测结果符合率为91.7%。结果表明,建立的检测方法可用于临床PCV2抗体的检测。

This study established an indirect antibody enzyme-linked assay system based on the expressed Cap protein. We optimized some factors such as antigen coating concentration （10 μg/mL）, the dilution of serum samples （1 ： 160）, blocking reagent （10% bovine serum）, the work concentration of HRP-labeled anti-porcine IgG （1 ： 1000）, reacted conditions of sam- ples and HRP-labeled anti-porcine IgG （37 ℃, 60 min）. The value of cutoff is 0.25. The CV is not beyond 0.1. In the detec- tion of 60 clinical samples, the established ELISA showed excellent agreement with the compared kit （91.7 %）. The developed ELISA is suitable for PCV2 monitoring and detection, especially for screening large number of samples in farms.