鱼藤素阻断HL-60细胞生存信号通路调控作用的初步研究

目的：研究鱼藤素对人类白血病细胞株HL-60细胞系体外抗肿瘤作用，探讨AKT的功能活化状态p-AKT及抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2在白血病HL-60细胞中的表达及相关性。方法：采用WST-1细胞增殖实验观察细胞的生长抑制作用，原位末端标记（TUNEL）法观察细胞凋亡指数，应用AnnexinV／PI双染和流式细胞仪计数，观察细胞是否发生凋亡，利用透射电镜观察细胞形态学变化。Western blot检测鱼藤素对HL-60细胞内p-AKT、Survivin、Bcl-2蛋白表达的影响，并进行分析。结果：WST1实验结果显示，经过10～80nmol／L鱼藤素处理48h后，HL-60细胞的生长受到不同程度的抑制，抑制率分别为（10．13±3．16）％、（13．84±2．02）％、（30．72±3．82）％和（47．05±1．36）％，并呈现出比较明显的浓度依赖关系。鱼藤素诱导HL-60细胞发生了早期凋亡，40nmol／L鱼藤素处理HL-60细胞48h和72h，AnnexinV-PI^-标记的早期凋亡细胞所占的比例分别为相应对照组的2．06倍和5．33倍，透射电镜、荧光显微镜下能观察到胞核浓缩、碎裂以及凋亡小体的形成。细胞内P—AKT、Bcl-2及Survivin均发生不同程度的降解，细胞内重要的生存信号通道P13K／AKT被阻断，细胞发生凋亡。结论：鱼藤素可以通过清除细胞内重要信号蛋白、阻断细胞生存信号通路来诱导HL-60细胞发生凋亡。