人类核糖核酸酶9基因的克隆及表达载体的构建

目的:构建人类核糖核酸酶9(human ribonuc lease9,hRNase9)的重组表达载体。方法:从成年人附睾组织提取了总RNA,通过RT-PCR扩增了hRNase9编码成熟肽的基因片段,将其克隆入载体pET25b(+)的NdeI和EcoRI位点之间,构建了重组表达载体pET25b(+)-hRNase9,并通过PCR法、限制性内切酶消化法和DNA序列测定加以证实,以IPTG诱导重组载体转化宿主菌E.coliBL21(DE3)表达重组hRNase9蛋白。结果:重组载体pET25b(+)-hRNase9构建成功,SDS-PAGE显示重组载体转化宿主菌E.coliBL21(DE3)表达了Mr约为21000的重组hRNase9蛋白。结论:成功的扩增了hRNase9编码成熟肽的基因片段,构建了重组表达载体pET25b(+)-hRNase9,为下一步研究奠定了基础。