过氧化物酶增殖物激活受体-γ调节体外诱导培养的人巨噬细胞表达基质金属蛋白酶-9及其抑制物-1的作用及机制

Effects of PPAR-γ agonist rosiglitazone on MMP-9 and TIMP-1 expression of monocyte-derived macrophages isolated from patients with acute coronary syndrome

目的探讨过氧化物酶增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）在调节急性冠状动脉综合征（ACS）患者外周血单核细胞源性巨噬细胞（MDM）表达基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制物-1（TIMP-1）中的作用及可能机制。方法选取ACS患者48例（ACS组）、对照者28例（对照组），提取外周血单个核细胞，刺激培养为MDM。随机将ACS组及对照组MDM分别分为罗格列酮0、1、10和20umol／L亚组，分别于相应亚组加入血清、1、10和20umol／L浓度的罗格列酮干预。然后测定各亚组MDM上清液中MMP-9、TIMP-1浓度及MDM细胞中PPAR-γ MMP-9、TIMP-1mRNA表达强度，并用免疫组织化学法测定核因子-kB（NF-kB）蛋白表达变化。分析比较ACS组与对照组间不同浓度罗格列酮干预亚组表达PPAR-γ、MMP-9、TIMP-1 mRNA及MMP-9、TIMP-1、核因子-k B P65（NF—k B P65）蛋白水平上的差异。结果罗格列酮干预后，ACS组及对照组MDM中PPAR-1mRNA表达明显上调[PPAR-1mRNA，ACS组：0．25±0．05，0．26±0．07，0．74±0．12，0．86±0．12，1．16±0．26，1、10、20umo]／L亚组与干预前及0umol／L亚组比JP2较P均〈0．01；对照组：0．39±0．06，0．37±0．04，0．99±0．10，0．99±0．09，1．00±0．12，1、10、20umol／L亚组与干预前及0umol／L亚组比较P均〈0．01；数据排列顺序为干预前、0、1、10、20umol／L亚组，下同]，在ACS组中表达强度与罗格列酮浓度呈正比关系。ACS组及对照组MDM上清液中MMP-9浓度下降[MMP-9浓度（mmol／L），ACS组：231±51，215±47，181±36，172±30，151±24，1、10、20umol／L亚组与干预前及0umol／L亚组比较P均〈0．01；对照组：138±15，127±15，119±13，112±17，107±18，1umol／L亚组与干预前比较P〈0．05，10、20umol／L亚组与干预前比较P均〈0．01，10umol／L亚组与0umol／L亚组比较P〈0．05，20umol／L亚组与0umol／L亚组比较P〈0．01]；MDM中MMP-9mRNA表达下调[MMP-9mRNA，ACS组：0．67±0．11，0．62±0．10，0．54±0．05，0．48±0．10，0．41±0．06，1、10、20umol／L亚组与干预前比较P均〈0．01，10、20umol／L亚组与0umol／L亚组比较P均〈0．01，1umoL／L亚组与0umol／L亚组比较P〈0．05；对照组：0．24±0．08，0．26±0．09，0．20±0．05，0．22±0．05，0．20±0．04，10、20umol／L亚组与干预前及0umol／L亚组比较P均〈0．01，1umol／L亚组与干预前比较P〈0.05]，ACS组中下调程度与罗格列酮浓度呈反比关系。ACS组和对照组上清液中TIMP-1浓度及MDM中TIMP-1 mRNA的表达无明显变化。ACS组和对照组MDM中NF—kB P65表达下调[NF—kB P65 OD值，ACS组：0．42±0．09，0．41±0．09，0．34±0．04，0．34±0．04，0．32±0．05，1、10、20umol／L亚组与干预前及0umol／L亚组比较P均〈0．01；对照组：0．28±0．03，0．25±0．04，0．23±0．03，0．23±0．04，0．22±0．05，1、10、20umol／L亚组与干预前及0umol／L亚组比较P均〈0．05]，不同浓度罗格列酮亚组间差异无统计学意义。结论罗格列酮可能通过上调PPAR-1表达，减低ACS组NF—kB水平，而下调ACS患者MDM表达MMP-9，但TMPI-1表达不受此调节。罗格列酮可能具有稳定ACS患者动脉粥样斑块的作用。

Objective Coronary arterial plaque rupture and secondary thrombosis are the major pathogenesis of acute coronary syndrome （ACS） . Metalloprotease （MMPs） secreted by monocyte/ macrophage was the main predisposing factor of the plaque rupture and peroxisome proliferator-activated receptor-γ （PPAR-γ） is involved in a variety of inflammatory cytokine gene transcriptional regulations. We explored the possible role of PPAR-γ in the regulation of MMP-9 and TIMP-1 expressed by peripheral monocyte-derived macrophages （MDMs） from patients with ACS. Methods Peripheral blood mononuclear cells were isolated from 48 patients with ACS and 28 healthy controls and stimulated by macrophage colony- stimulating factor （0. 1 ug/ml for 24 hours） to form MDMs. MDMs were then incubated under various concentrations of rosiglitazone （0, 1, 10, 20 umol/L） for 48 hours. The concentrations of MMP-9 and TIMP-I in the supernatant were measured by enzyme linked immunosorbent assay, and the mRNA expression of PPAR-γ, MMP-9 by RT-PCR and nuclear factor-KB P65 （NF-KB P65 ） expression by immunohistochemistry. Results PPAR-3, mRNA expression was significantly lower while NF-KB P65 and MMP-9 expression as well as MMP-9 and TIMP-1 concentrations in supernatant were significantly higher in ACS group than those in control group （ all P 〈 0. 05 ）. After rosiglitazone intervention, PPAR-γ mRNA expression was significantly upregulated in both ACS and control groups in a dose-dependent manner. Both the MMP-9 concentration in the supernatant and MMP-9 mRNA expression were reduced post intervention with rosiglitazone in both groups. The TIMP-1 mRNA expression and concentration in supernatant were not affected by rosiglitazone in both groups. Rosiglitazone induced significant downregulatio, of NF-KB P65 expression in both groups. Conclusion Rosiglitazone intervention may downregulate MMP-9 expression by upregulating PPAR-γ expression, and by downregulaiting NF-KB expression in MDMs isolated from patients with ACS.