小鼠白细胞介素6的克隆表达纯化及鉴定

目的构建小鼠白细胞介素6(mIL-6)工程菌,通过诱导表达和纯化,得到较高纯度的重组mIL-6融合蛋白。方法提取小鼠脾脏淋巴细胞总RNA,RT-PCR扩增得到mIL-6基因片段,克隆入pReceiver-B56x表达载体,转化BL21,诱导表达重组蛋白,采用亲和层析纯化。结果工程菌采用LB培养基,14℃、1mmol/L的IPTG诱导,表达量占菌体蛋白总量的33.3%,部分为可溶表达。超声破碎菌体,离心后取上清液,经过亲和层析一步纯化,目的蛋白纯度达91.3%。结论构建了高效表达mIL-6的工程菌,目的蛋白部分为可溶表达,为进一步研究白细胞介素6在促进凝血、造血等方面的生物学功能以及其与疾病发生发展的相互关系,并基于此基础上的相关药物开发研究奠定了基础。