体外培养鉴定恒河猴结膜上皮细胞的研究

【目的】通过在体外培养鉴定恒河猴结膜上皮细胞,探讨结膜上皮细胞的正常的生长环境,为深入研究眼表疾病的发病机理奠定基础。【方法】取健康恒河猴结膜上皮在体外进行分离培养,通过组织块培养法进行原代培养,传代培养后进行鉴定。分别采用倒置显微镜观察,细胞免疫化学,以及RT-PCR技术进行鉴定。【结果】恒河猴结膜上皮细胞在24 h内从组织块爬出,上皮细胞成层状向周边铺展,平均7 d左右细胞可以融合成单层。原代培养生长的细胞以结膜上皮细胞为主,混杂有少许的成纤维细胞。传至第3代细胞,基本纯化为上皮细胞,无成纤维细胞混杂。原代和第1、2、3代的结膜上皮细胞,皆呈现细胞胞浆粘蛋白4和角蛋白4阳性。但是,原代的部分细胞呈现MUC5AC和角蛋白7染色阳性,第1代少数细胞染色阳性,而第3代细胞基本上未见阳性细胞。原代培养的细胞进行RT-PCR检测,显示421 bp和632 bp明亮的特异性条带。【结论】对恒河猴结膜上皮体外取材培养,可以获取纯度较高的结膜上皮细胞,其生理特征与体内相同,可以在体外模拟类似的眼表环境。