摘要
目的:建立优化的差示PCR条件;运用建立的条件分离胃癌GC7901与胃粘膜GES-1细胞株之间的差异表达基因;根据获取的序列,设计引物并运用于检测胃癌组织、血、活检胃粘膜标本,拟筛选出检出率与符合率高的数对引物,建立胃癌基因诊断方法.方法:LJGC7901与GES-1细胞株为研究对象,探索mRNA差示PCR的最佳反应条件,运用优化的条件分离细胞株之间的差异表达基因;以回收的片段作探针,打点杂交证实为真正的差异片段后,对产物进行直接测序及同源性检索;设计引物,采用RT-PCR方法检测胃癌组织、血、活检胃粘膜标本.结果:优化的差示PCR条件为:前5轮PCR循环采用94℃35s,40℃2min,72℃30s,后35轮PCR循环采用94℃45s,55℃2min,72℃1min,最后在72℃延伸7min;分离回收差异条带154条,从中选出17个片段作探针,打点杂交证实在两细胞株之间呈差异表达;对17个片段进行了测序,其中17个新序列被GenBank接受,接受号为AF054162至AF054172,AF071052至AF071058;其中5个序列引物在26例胃癌标本中检出覆盖率为100%,在9例病理确诊的胃癌患者活检胃粘膜中检出率100%,在17例病理确诊为胃癌患者血标本中检出率为53%.结论:优化了mRNA差示PCR技术条件;分离出154个差异表达的基因片段;筛选出17个新序?
Aim: In order to establish a gene diagnosticmethod for gastric cancer, optimized condition of mRNADD-PCR and isolation of messenger RNAs differentiallyexpressed in cell line GC7901 or GES-1 were investigated.
出处
《第四军医大学学报》
1998年第6期601-605,共5页
Journal of the Fourth Military Medical University