微量高通量细胞培养法在脑炎病毒分离中的应用

目的建立用微量高通量、多细胞谱培养法分离未明原因脑炎患儿中病毒的方法，探讨脑炎患儿中肠道病毒的感染情况。为大量、及时分离病毒、病毒鉴定和分子流行病学研究奠定基础。方法将8株不同的细胞接种于96孔细胞培养板中，每种细胞接种一行，细胞长成单层后孔内接种脑脊液标本，每孔5～10μl，每份标本纵向接种8孔（8种细胞系），35℃、5％CO2培养。出现细胞病变（cytopathic effect，CPE）者传代培养两次。两次均出现CPE者视为细胞培养阳性，-70℃保存用于病毒鉴定。将培养物首先用肠道病毒通用引物做逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）并测序，进行初步筛查。结果93份标本中有56份出现明显的CPE，病毒分离率为60．22％（56／93），其中在MA104细胞出现病变者40份，阳性率为43．01％。其中6份培养物的RNA用肠道病毒通用引物得到了扩增，序列测定确定为肠道病毒。结论微量多细胞培养法具有简便、快速等特点，适合用于病毒的初步筛查。