利用限制性内切酶诱导整合(REMI)获得稻瘟病菌突变体

Obtaining Insertion Mutants in Magnaporthe grisea by Restriction Enzyme-Mediated Integration of Plasmid

限制性内切酶诱导整合（ＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎＥｎｚｙｍｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄＩｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ，简称ＲＥＭＩ，下同）已被成功用于创造随机插入突变和提高转化频率。用限制酶消化的线状质粒ｐＣＳＮ４３或ｐＢＦ１０１，并加一定量的同种限制酶，转化稻瘟病菌（Ｍ．ｇｒｉｓｅａ）的原生质体后，得到约４５０个转化子。对一些表型进行测试后，获得两个分生孢子形态突变体。与野生型相比较，突变体的分生孢子细而且长，呈棒形。ＲＥＭＩ非常有用，因其能提高转化频率，较容易地获得期望数目的转化子；限制性内切酶可随机切割寄主染色体，便于插入线状质粒，导致基因突变。可根据异常表型判定基因的功能，根据插入质粒克隆该基因。