血管紧张素(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导脐静脉内皮细胞表达E-选择素和单核细胞趋化蛋白1的影响

The Influence of Angiotensin-(1-7) on the Secretion of E-selectin and Monocyte Chemotactic Protein-1 in Cultured Human Umbilical Vein Cells Induced by Angiotensin Ⅱ

目的研究血管紧张素（1-7）对血管紧张素Ⅱ诱导的脐静脉内皮细胞E-选择素和单核细胞趋化蛋白1表达的影响,并初步探讨血管紧张素（1-7）的作用机制,阐明血管紧张素（1-7）对血管紧张素Ⅱ在炎症方面的拮抗作用。方法经形态学及抗VⅢ因子抗体免疫荧光染色鉴定的人脐静脉内皮细胞,按以下分组加入不同干扰因素进行实验。实验分组：①对照组：不加干预因素;②血管紧张素Ⅱ组：加入血管紧张素Ⅱ100 nmol/L;③血管紧张素（1-7）组：加入血管紧张素（1-7）1000 nmol/L;④血管紧张素Ⅱ＋血管紧张素（1-7）组：分别用血管紧张素（1-7）10、100、1000、10000 nmol/L预处理30 min后,再加入血管紧张素Ⅱ100 nmol/L;⑤血管紧张素Ⅱ＋血管紧张素（1-7）＋血管紧张素（1-7）受体拮抗剂A-779组：先用1000 nmol/L A-779预处理30 min后,再用终浓度为1000 nmol/L血管紧张素（1-7）预处理30 min,最后加入终浓度100 nmol/L血管紧张素Ⅱ。各组用酶联免疫吸附法和逆转录聚合酶链反应从蛋白和mRNA水平检测E-选择素和单核细胞趋化蛋白1的表达情况。结果正常细胞生长良好,呈鹅卵石样镶嵌排列,细胞透明度大,轮廓不清。荧光免疫组化染色法,可检测到培养的人脐静脉内皮细胞的VⅢ因子相关抗原为阳性。①与对照组比,血管紧张素Ⅱ（100 nmol/L）使E-选择素（25.39±1.97μg/L）和单核细胞趋化蛋白1（238.71±5.51 ng/L）的蛋白分泌量明显增加,E-选择素和单核细胞趋化蛋白1 mRNA的表达显著升高（均P〈0.01）;②血管紧张素（1-7）（1 000 nmol/L）使E-选择素（3.72±0.95μg/L）和单核细胞趋化蛋白1（90.24±9.82 ng/L）的蛋白分泌量降低,E-选择素和单核细胞趋化蛋白1 mRNA表达亦降低（均P〈0.01）;③混合刺激组中血管紧张素（1-7）（1010000 nmol/L）减少E-选择素蛋白合成,分别为21.15±1.31、17.41±1.94、12.71±1.84、9.46±1.40μg/L,均低于血管紧张素Ⅱ组（均P〈0.01）;同时也减少单核细胞趋化蛋白1蛋白合成,分别为214.57±7.16、196.83±8.20、176.63±8.93、155.52±8.19 ng/L,均低于血管紧张素Ⅱ组（均P〈0.01）;④混合刺激组中,与AngⅡ组比较,血管紧张素（1-7）（1010000 nmol/L）呈剂量依赖性的抑制AngⅡ刺激E-选择素、单核细胞趋化蛋白1 mRNA的表达（均P〈0.01）;⑤加入血管紧张素（1-7）受体拮抗剂A-779后,血管紧张素（1-7）的作用消失。结论血管紧张素（1-7）通过其特异性受体Mas拮抗血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞E-选择素和单核细胞趋化蛋白1的表达,并呈浓度依赖性。

Aim To explore the influence of angiotensin-（1-7） [Ang-（1-7）] on the secretion of E-selectin（E-sel） and monocyte chemotactic protein-1（MCP-1） in cultured human umbilical vein cells induced by angiotensin Ⅱ（AngⅡ）,and to clarify the antagonism of Ang-（1-7） on the inflammation induced by AngⅡ. Methods The cultured human umbilical vein endothelial cells（HUVECs） were randomly divided into control group,AngⅡ group,Ang-（1-7） group,Ang-（1-7）＋AngⅡ group,and A-779＋Ang-（1-7）＋AngⅡ group.The expressions of E-sel and MCP-1 inprotein level and mRNA level were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA） and reverse transcription polymerase chain reaction（RT-PCR）. Results ①Compared with the control group,100 nmol/L AngⅡ distinctly increased the protein of E-sel（25.39±1.97 μg/L） and MCP-1（238.71±5.51 ng/L） in HUVECs（P〈0.01）,and significantly increased mRNA expression of E-sel and MCP-1 in HUVECs（P〈0.01）.②Compared with the AngⅡ group,Ang-（1-7）（1 000 nmol/L） decreased the protein of E-sel（3.72±0.95 μg/L） and MCP-1（90.24±9.82 ng/L）（P〈0.01）,and the mRNA expression of E-sel and MCP-1（P〈0.01）.③10～10 000 nmol/L Ang-（1-7） attenuated the protein of E-sel in HUVECs induced by AngⅡ in a concentration dependent manner（21.15±1.31 μg/L,17.41±1.94 μg/L,12.71±1.84 μg/L and 9.46±1.40 μg/L）（P〈0.01）,and also inhibited the protein of MCP-1 in HUVECs induced by AngⅡ in a concentration dependent manner（214.57±7.16 ng/L,196.83±8.20 ng/L,176.63±8.93 ng/L and 155.52±8.19 ng/L）（P〈0.01）.④Compared with the AngⅡ group,10～10 000 nmol/L Ang-（1-7） inhibited the mRNA expression of E-sel and MCP-1 in HUVECs induced by AngⅡ in a dose dependent manner（P〈0.01）.⑤The A-779 group had no significant deviation than the AngⅡ group（P〉0.05）. Conclusions Ang-（1-7） inhibited the secretion of E-sel and MCP-1 in cultured HUVECs induced by AngⅡ in a concentration dependent matter.The inhibition effect of Ang-（1-7） may be through its specific receptor.