pSC101-pMB1质粒双复制子质粒的构建

目的构建带有pSC101和pMB1复制子的质粒。方法将pSC101、pUC19(pMB1型复制子)分别用Eco-RI限制性内切酶消化后,DNA连接酶连接,转化大肠杆菌DH5a,筛选重组子,提取质粒电泳分析;氯霉素培养条件下提取双复制子质粒及其检测OD260值,并将双复制子质粒转化ploA-大肠杆菌。结果阳性重组子带有1个11.9 kb质粒,该质粒带有氨苄青霉素和四环素耐药基因的质粒,氯霉素培养条件下双复制子质粒的提取物OD260值增加,并能转化ploA-大肠杆菌。结论构建的质粒带有pSC101和pMB1 2类复制子。