2，5-己二酮对坐骨神经及运动神经元瘤细胞VSC4．1神经生长因子水平的影响

The effect of 2,5-hexanedione on nerve growth factor in sciatic nerve of rats and VSCA. 1 cell

目的研究2，5-己二酮（2，5-hexanedione，2，5-HD）对大鼠坐骨神经和运动神经元神经生长因子（nerve growth factor，NGF）水平的影响。方法应用随机数字表法将50只Wistar大鼠分为400mg·kg^-1·d^-12，5-HD染毒0、7、14、21、28d组，每组10只，采用免疫组织化学显色和荧光定量PCR检测不同时间坐骨神经横断面NGF水平和坐骨神经NGF mRNA水平。选用0．2．5、5．0、10．0、20．0mmol／L2，5-HD染毒神经元瘤细胞VSCA．1，应用免疫荧光法观察NGF水平的改变；并选用10．0mmol／L2，5-HD作染毒剂量，观察0、1、3、6、12、24、48hNGF水平的变化。结果随染毒时间延长，坐骨神经NGF呈先增高后降低的趋势；坐骨神经NGF mRNA水平在染毒14d（2^-△△Ct=3．46）、21d（2^-△△Ct=5．28）和28d（2^-△△Ct=3．10）高于染毒0d（2^-△△Ct=1）和7d（2^-△△Ct=0．78），差异有统计学意义。各染毒剂量组VSGA．1细胞NGF水平差异有统计学意义（F=188．88，P〈0．01）；5．0、10．0、20．0mmol／L组NGF平均荧光强度值（分别为43．24±7．52、43．48±10．86、63．13±10．68）高于0mmol／L组（16．32±4．20）（q值分别为19．92、19．72、32．78，P值均〈0．01）和2．5mmol／L组（19．78±2．66）（q值分别为17．50、17．42、30．63，P值均〈0．01）；20．0mmol／L组高于5．0、10．0mmol／L组（q值分别为13．04、11．71，P值均〈0．01）。10．0mmol／L2，5-HD染毒不同时间VSC4．1细胞NGF水平差异有统计学意义（F=75．69，P〈0．01）；染毒6、12、24、48hNGF平均荧光强度值（分别为18．66±2．89、23．14±6．08、27．66±6．11、17．25±3．05）高于染毒0h（10．18±1．81）（q值分别为9．64、15．74、21．76、8．50，P值均〈0．01）、染毒1h（9．31±1．28）（q值分别为10．28、16．17、21．95、9．20，P值均〈0．01）和染毒3h（10．44±2．13）（q值分别为9．25、15．24、21．17、8．10，P值均〈0．01）；染毒12、24hNGF平均荧光强度值高于染毒6h（q值分别为5．24、10．77，P值均〈0．01）和染毒48h（q值分别为7．31、13．26，P值均〈0．01）。结论一定时间内，2，5-HD可导致大鼠坐骨神经和运动神经元NGF的水平升高，有剂量（时间）依赖关系。

Objective To explore the effect of 2,5-hexanedione （2,5-HD） on the levels of nerve growth factor （NGF） in sciatic nerve of rats and motor-neurons. Method A total of 50 Wistar rats were randomly designed into five groups and intoxicated with 400 mg.kg^-1 . d^-1 2,5-HD for 0,7,14,21,28 d. Immunohischemistry and real-time PCR were used to detect the levels of NGF and NGF mRNA. Motomeuron VSCA. 1 cells were administrated with 0,2. 5,5.0,10. 0,20. 0 mmol/L 2,5-HD for 24 h and 10. 0 mmol/L 2,5-HD was chosen to intoxicated VSCA. 1 cells for 0,1,3,6,12,24,48 h respectively. Immunofluoreseenee technique was selected to detect the levels of NGF. Results The NGF level in sciatic nerve of rats administrated with 400 mg.kg^-1 . d^-1 2,5-HD showed increase tendency at begin and then decrease afterexposure. The NGF mRNA level in 14 d （2 ^-△△Ct =3.46） ,21 d （2^-△△Ct =5.28） and 28 d （2^-△△Ct=3.10） were higher than those in 0 d （2^-△△Ct = 1 ） and 7 d （2^-△△Ct =0. 78）. In vitro tests of VSCA. 1 cells showed that NGF levels in 5.0 mmol/L （ 43.24 ± 7. 52 ）, 10. 0 mmoL/L （ 43.48 ± 10. 86 ） and 20. 0 mmol/L （63.13 ± 10.68） were higher than those in 0 mmoL/L （16.32 ±4.20） （q values were 19.92,19.72, 32. 78 ,respectively,P 〈0. 01 ） and 2. 5 mmol/L （ 19.78 ± 2. 66 ） （ q values were 17.50, 17.42,30. 63, respectively,P 〈0. 01 ） in 24 h and the NGF level in 20. 0 mmol/L was higher than those in 5.0 mmo//L （q=13.04,P〈0.01） and 10.0 mmol/L （q=11.71,P〈0.01）.The NGF levels ofVSCA. 1 cells with 10.0mmol/L2,5-HD in 6 h （18.66±2.89）,12 h （23.14 ±6.08）,24 h （27.66 ±6.11） and 48 h （17.25 ±3.05） were increased compared with that in 0 h （10. 18 ± 1.81） （q values were 9.64,15.74, 21.76,8.50,respectively, P 〈 0. 01 ）, 1 h （ 9.31 ± 1.28 ） （ q values were 10.28, 16. 17,21.95,9. 20, respectively, P 〈 0. 01 ） and 3 h （ 10. 44 ± 2. 13 ） （ q values were 9. 25,15.24,21.17,8.10, respectively, P 〈 0. 01 ） ,and NGF levels in 12 h and 24 h increased compared with those in 6 h （q values were 5.24,10. 77, respectively,P 〈 0. 01 ） and 48 h （ q values were 7. 31,13.26, respectively, P 〈 0. 01 ）. Conclusion 2,5-HD could increase NGF levels in sciatic nerve of rats and motor-neurons,and the dose or time dependent effects were observed in this study.