摘要
免疫-聚合酶链式反应(免疫-PCR)集PCR的高敏感性与免疫学反应的特异性于一体,极大地提高了免疫检测的水平。本实验依据免疫-PCR的基本原理,结合国内实际情况,初步建立了免疫-PCR的实验方法,并对实验条件进行了摸索。 采用易得的人IgG作为抗原,生物素化羊抗人IgG(Bio-SaHIgG)作为抗体,链霉亲和素(SA)充当连接分子,生物素化线性质粒pUC18(Bio-pUC18)为标记物组建免疫-PCR模式。 实验结果如下:针对pUC18作为标记物,免疫-PCR的扩增反应程序为:94℃预变性180秒,30个三温循环(94℃变性60秒,58℃退火60秒,72℃延伸60秒),72℃末延伸300秒为宜;用优化后的条件组建的免疫-PCR的检测灵敏度为1.2×10^(-8)g/ml,最低检测限为1.2fg(相当于4500个人IgG分子);比对照BA-ELISA敏感10~6倍,特异性强、重复性较好、敏感度之高是目前其它免疫分析方法无法比拟的;分析了多种影响免疫-PCR的因素,将为微量物质的检测提供一种新的、敏感的免疫测定方法。
