荧光素酶报告基因检测RNA干扰胆囊癌GBC-SD细胞VEGF基因的研究

目的构建靶向人胆囊癌GBC-SD细胞VEGF基因的shgNA，通过萤火虫荧光素酶报告基因活性检测分析shRNA对人胆囊癌GBC—SD细胞VEGF表达的影响。方法根据人VEGF基因的序列设计shgNA。设计针对VEOF的特异性引物，将其重组到萤火虫荧光素酶报告基因载体上，并测序验证正确后，与shRNA共同瞬时转染到胆囊癌G-BG—Sd细胞中，观察并进行萤火虫荧光素酶活性分析。主要观察指标：包含针对VEGF引物的萤火虫荧光素酶报告基因重组载体测序结果，荧光素酶活性分析结果。结果成功构建了包含针对VEGF II物的萤火虫荧光素酶报告基因重组载体，并经测序验证。荧光素酶活性分析表shRNA—VEGF明显干扰胆囊癌VEGF的表达（P〈005）。结论萤火虫荧光素酶报告基因实验验证shRNA干扰可显著抑制人胆囊癌细胞VEG-F表达。