用dhfr非缺陷型细胞高效表达EPO基因的研究

用我们所克隆的促红细胞生成素 (EPO)基因组基因 ,构建了表达载体 pRSV/EPO .用脂质体法转染CHO K1 2细胞 ,在 40 0 μg/mL的G41 8浓度下筛选到了稳定表达EPO的细胞株 ,表达量约为每天每 1 0 6细胞 1 6 0IU .在此基础上又构建了带有潮霉素B抗性的二氢叶酸还原酶 (dhfr)基因表达载体 pHY/dhfr,再将这一表达载体用脂质体方法导入C1 0细胞中 ,经2 0 0 μg/mL的潮霉素B筛选 ,获得了部分潮霉素B抗性的细胞株 ,这些细胞株既能表达EPO又能表达外源的dhfr基因 ,经 1 μmol的氨甲喋呤 (MTX)加压筛选 ,获得了表达量为每天每1 0 6细胞 2 40 0IU的高表达细胞克隆 ,表达量提高了 1 0～ 1 5倍 .初步建立了用非dhfr缺陷型细胞高效表达外源基因的方法 ,这一方法在生产上有实际意义 ,在理论上值得进一步研究 .用TF 1细胞对EPO进行了生物活性检测 。