重组人肿瘤坏死因子中二硫键的测定

The Determination of Dilsulfide Bond in Recombinant Human Tumor Necrosis Factor

本文通过电喷雾质谱对流基乙醇还原二硫键的过程进行了动态监测。通过对还原过程中质量数变化的监测，确定了重组人肿瘤坏死因子中二硫键的数目，正确区分正常表达的重组人肿瘤坏死因子和基因工程改构产品，为基因工程产品鉴定提供了一条新的途径。蛋白质中的二硫键在蛋白质高级结构的稳定性及生物学活性中都有着重要的作用［1］，研究二硫键的结合情况始终是生化领域的一个重要课题。二硫键是两个半胱氨酸残基之间形成的一个化学健，它使多肽键的不同区域紧密连接，维持分子折叠结构的稳定性。分子中是否存在二硫键，以及二硫键是否正确结合在蛋白质化学中是一个十分重要的问题。人肿瘤坏死因子（hTNF）是近年来研究较广泛的一种细胞因子，其一级结构中第69位和101位为半胱氨酸，在分子内形威一对二硫键［2］。在hTNF的蛋白质工程研究中，有人将69位和101位Cys的分别用AsP和Arg取代，获得改构的TNF仍具有TNF的生物学活性。因此鉴定rhTNF中是否存在二硫键成为区分rhTNF和改构TNF的重要途径。

A new method was established to count the number of disulfide bonds by dynamic screen-the procedure of the reduction of protein with mercaptoethanol by electrospray mass spectrometry. The number of disulfide bond in recombinant human tumor necrosis factor was well determined, which gives out a new way to distinguish the normal rhTNF and the reconstructed one.