盐酸胍对人类胎盘碱性磷酸酶构象与活力的影响

研究人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ，Ｅ．Ｃ．３．１．３．１）在胍变性过程中构象与活力的变化；测定胍存在时酶的表观米氏常数（Ｋｍ）。结果表明，低浓度的盐酸胍（＜０．５ｍｏｌ／Ｌ）使变性平衡态酶的发射荧光强度略有下降，酶活力增强；随盐酸胍浓度的增加，其荧光强度不仅不再下降，反而升高，酶逐渐失活；当盐酸胍浓度为１．５ｍｏｌ／Ｌ时，其荧光光谱的最大峰位红移，酶活力迅速下降；当盐酸胍浓度为３ｍｏｌ／Ｌ时，峰位由３３３．５ｎｍ红移至３５７．１ｎｍ，此时酶活力丧失；当盐酸胍浓度为４ｍｏｌ／Ｌ时，峰位不再红移，但其荧光强度继续增加。测得变性初态酶的表观Ｋｍ值随盐酸胍浓度的增加而增大。结果说明，荧光强度的增加和最大发射峰位的红移是该酶变性失活的一个灵敏指标；酶活力的变化明显快于酶分子整体构象的变化；低浓度的盐酸胍微扰了酶活性部位的构象，而对其整体构象无显著影响。提示酶活性部位具有柔性。