外源脑啡肽基因在哺乳动物体细胞的表达

Die Expression vom Exogenen Humanenkephalingen in den Somatischen Mammalianzellen

评价转染脑啡肽基因体细胞用于爱滋病和晚期癌症患者生物镇痛的可行性。方法：采用磷酸钙共沉淀法和脂质体包裹法，分别将ｈｅｎｋ基因或ｈｅｎｋ与ｎｅｏ基因导入三种哺乳动物体细胞，观察转染效率并用放射免疫法测定转染后ｈｅｎｋ基因的瞬时表达及稳定表达水平。结果：双基因共转染加Ｇ４１８筛选组的ｈｅｎｋ基因稳定表达水平（１００～２００ｐｇ／ｍＬ）明显高于单基因转染未经筛选组（６０～１００ｐｇ／ｍＬ）；脂质体包裹法在基因转染率（１３３％～１６１％）及表达水平（１５０～２４０ｐｇ／ｍＬ）方面均优于磷酸钙共沉淀法（２０％～２６％和１００～２００ｐｇ／ｍＬ），两者的稳定表达水平与ＰＣ－１２细胞的分泌水平（１６０ｐｇ／ｍｌ）相当，均能满足细胞镇痛的要求。结论：转脑啡肽基因体细胞的脑啡肽分泌量（１０７个细胞）可以满足镇痛的要求。若用于ＡＩＤＳ患者，可望长时间地缓解全身疼痛。

Ziel:Opiumsucht und Sexualanomalie sind die wichstigsten Ursachen der HIV-Ausbreitung. Und manche AIDS-Patienten klagen auch stndig über Krperschmerzen. Statt der Opiate für Schmerztherapie kann man die Biozellenanalgesie ohne Gefahr der Opiatsucht selektieren. Mit dieser Studie wird beurteilt, ob die somatischen Mammalianzellen nach der Transfektion mit dem Humannenkephalingen dazu eine genügende Rolle spielen knnen.[WTHZ]Methoden: pCMVhPPE ist ein Rekombinationsplasmide mit Humanenkephalingen und hCMV-Promoter, whrend das pRSVneo das selektiven Gen (neo Gen) enthlt. Die Transfektion von diesen Plasmiden in die somatischen Mammalianzellen (NIH/3T3-,MDCK-und WISH-Zelllinie) wurden unter der Teilnahme von Kalzium phosphoricum oder Lipofectamin durchgeführt. Das von den Zellen ausgeschiendene Enkephalin im Kulturmedium wurde mit der radioimmunologischen Methode gemessen. Dabei wurden die normalen Zellen als Negativkontrolle und die PC12 Zelle als Positivkontrolle verwandt. Mit der Hilfe des selektiven G418-Mediums konnte man die positiven Transfektionsklone bekommen und die Transfektionsrate rechnen.Ergebnisse:Die Enkephalinkonzentration im Medium der Gruppen ohne G418-Siebung (60～100 pg/mL) war signifikant niedriger als die mit G418-Siebung (100～200 pg/mL), die der Ausscheidungsmenge von PC-12 Zellen (160 pg/mL) entspricht war. Die Transfektionsrate und Genexpression mit Lipofectamin (13.3%～16.1% und 150～240 pg/mL) waren eindeutlich hher als die mit Kalzium phosphoricum (2.0%～2.6% und 100～200 pg/mL). Schlussfolgerung:Mit Hilfe von Lipofectamin und G418-Siebungsmedium kann es eine hhere Transfektionsrate und Genexpression von Humanenkephalingen in Mammalianzellen erbringen. Die Enkephalin-Ausscheidungsmenge der genmodifizierten Mammalianzellen ist ausreichend für die Therapie gegen die chronische Schmerzen. Andererseits ist Enkephalin im ZNS gültig für die Immun-Upregulation und Verbesserung der senilen Demenz. Deshalb werden die solchen mit Enkephalingen modifizierten somatischen Zellen nützlich für die Prophylaxie der HIV-Ausbreitung und Schmerztherapie der AIDS-Patienten sein. Wenn diese Zellen im ZNS der Patienten wre, knnten die Immundepression und AIDS-assoziierte Demenz verbessert werden.