鸡堆型艾美耳球虫3-1E基因真核表达质粒的构建及其体外表达

为了构建鸡堆型艾美耳球虫(E.acervulina)3-1E基因真核表达质粒,试验应用RT-PCR技术从E.acervulina子孢子中扩增出3-1E基因片段,将其连接到克隆载体pMD18-T中得到重组克隆质粒pMD18-3-1E,阳性克隆质粒经鉴定正确后将3-1E基因片段亚克隆入真核表达载体pcD-NA3.1(+)中,得到重组阳性表达质粒pcDNA3.1(+)-3-1E。结果表明:阳性表达质粒经鉴定正确后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光法和免疫组织化学技术检测到了3-1E蛋白在293T细胞中的表达,说明E.acervulina3-1E基因真核表达质粒构建成功。