头花蓼重复片段多态性分析-多聚酶链式反应体系建立与正交优化

Optimization for ISSR-PCR System of Polygonum Capitatum Buch-Ham. ex D. Don by Orthogonal Design

目的:建立头花蓼ISSR的反应体系。方法:通过正交试验,研究了Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度这4个因素在3个水平上对ISSR-PCR的影响。结果:确立了适合于头花蓼ISSR PCR的优化体系:25μL PCR反应体系中含有1×buffer缓冲液(10 mmol.L-1 KC1,8 mmol.L-1(NH4)2SO4,10 mmol.L-1 Tris.HC1,pH 8.0),3.0 mmol.L-1 MgC12,d NTP 200μmol.L-1,2.0 U.25μL-1 Taq酶,0.25 mmol.L-1引物,40 ng.L-1模板DNA。利用温度梯度PCR,确定了最适宜的退火温度为48℃。结论:该优化体系的建立为进一步对头花蓼进行种质资源的遗传多样性分析奠定了基础。

Objective：To establish the optimum ISSR-PCR system of Polygonum capitatum.Method：The Mg2 ＋,dNTPs,primers and Taq DNA polymerase,were investigated to optimize the ISSR-PCR reaction system of Polygonum capitatum by orthogonal tests.Result：The optimized ISSR-PCR system of P.capitatum included 1 × DNA polymerase buffer（10 mmol·L^-1 KCl,8 mmol·L^-1（NH4）2SO4,10 mmol·L^-1 Tris.HC1,pH 8.0）,3.0 mmol·L^-1 MgCl2 200 μmol·L^-1 dNTPs,2.0 U.25 μL^-1 Taq DNA polymerase,0.25 mmol·L^-1 primer,40 ng·L^-1 DNA template,in 25 μL PCR reaction systerm.By temperature gradient PCR,the optimum annealing temperature was determined as 48 ℃.Conclusion：The optimized system laid the groundwork for ISSR molecular analysis of P.capitatum Buch-Ham.ex D.Don.