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BAALC转录本1-6-8逆转录病毒表达载体的构建

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摘要 目的构建含BAALC(brain and acute leukemia,cytoplasmic)1-6-8转录本的逆转录病毒表达载体。方法从KASUMI-1细胞株中提取mRNA,应用RT-PCR技术扩增BAALC 1-6-8获得目的基因,选用pMDTM18-TVector做TA克隆。分别双酶切TA克隆获得的阳性质粒和pcDNATM3.1/myc-His A+质粒,琼脂糖电泳纯化回收前者的小片段和后者的大片段,应用T4连接酶连接后转化至E.coliDH5α中。PCR扩增BAALC-myc-His基因序列,双酶切PCR产物和pLXSN载体,T4连接酶连接后转化至E.coliDH5α中,挑选阳性克隆,PCR、双酶切及测序鉴定。结果 PCR分别扩增TA克隆产物和重组pcDNATM3.1/myc-His A+-BAALC,在535bp处均可见一清晰的特异性扩增条带,显示TA克隆及重组真核表达载体成功;PCR扩增pLXSN-BAALC-His大小为664 bp,双酶切及测序结果证实目的基因片段正确插入到逆转录病毒表达载体pLXSN中。结论分离得到了BAALC 1-6-8转录本基因,并成功构建了pLXSN-BAALC-His表达载体。
作者 萧平难 徐兵 宋小燕 陈国枢 史鹏程 张妍琰 周淑芸
机构地区 南方医科大学南方医院血液科
出处 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1514-1516,共3页 Guangdong Medical Journal
基金 广东省科技计划项目(编号:2007B030704010)
关键词 BAALC TA克隆 双酶切 逆转录病毒载体
分类号 R735.7 [医药卫生—肿瘤]
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参考文献7

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二级参考文献6

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共引文献9

广东医学
2010年 第12期

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