乙肝病毒HBx基因荧光真核表达质粒的构建与鉴定

目的:克隆乙肝病毒HBx基因及构建增强型绿色荧光蛋白-HBx基因(pEGFP-N1-HBx)荧光真核表达质粒并进行表达鉴定。方法:以CH-HEP-1肝癌细胞株基因组DNA为模板PCR法扩增HBx基因,PCR产物测序分析正确后克隆至真核表达载体pEGFP-N1,命名为pEGFP-N1-HBx。将该质粒转染肝细胞株HepG2以RT-PCR及荧光显微镜检测其表达情况。结果:酶切鉴定和序列分析证实构建质粒含HBx基因,RT-PCR检测和荧光显微镜观察表明构建的pEGFP-N1-HBx在肝癌细胞株HepG2真核细胞中表达,且其绿色荧光蛋白瞬时表达率为20%～30%。结论:HBx基因克隆及其真核表达载体pEGFP-N1-HBx构建成功,可用于肝癌发生发展的生物学研究。