人IL-16基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的：构建并鉴定人白细胞介素16（IL-16）的重组腺病毒pad—IL-16表达载体，为进一步研究IL-16功能奠定基础。方法：分离正常人外周血单个核细胞（PBMC），组胺刺激后提取总RNA，RT-PCR扩增IL—16基因，将其克隆到含有绿色荧光蛋白（GFP）标记的腺病毒穿梭质粒pAdTrack—CMV后，再与腺病毒骨架质粒pAdEasy—1共转化BJ5183细菌，获得重组腺病毒载体pAd—IL-16，转染HEK293T细胞包装病毒。荧光显微镜下观察细胞内绿色荧光，测定病毒效价，RT—PCR和Western blot分别分析细胞内IL-16 mRNA和蛋白质的表达。结果：经双酶切及基因鉴定，重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒均见约400bp插入片段，测序结果和GenBank中的基因序列一致；重组病毒效价为2．8×10^8pfu／mL；重组病毒感染后，HEK293T细胞中IL-16 mRNA和蛋白质均有表达。结论：成功构建IL-16重组腺病毒载体，并可在HEK293T细胞中表达，为进一步研究IL-16的功能奠定了基础。