杀虫防病基因工程枯草芽孢杆菌的构建

分别以枯草芽孢杆菌大肠杆菌穿梭质粒ｐＨＢ２０１和ｐＲＰ２２为载体，通过感受态转化方法，将ＢｔＨＤ１杀虫蛋白基因ｃｒｙ１Ａｃ导入了水稻纹枯病生防菌株枯草芽孢杆菌Ｂ９１６。工程菌株质粒酶切电泳分析、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析和杀虫生物活性测定结果证实了ｃｒｙ１Ａｃ基因的导入及其在Ｂ９１６中的有效表达。抑菌测定证明工程菌株保持了原野生型菌株良好的抑菌活性。质粒稳定性分析表明以载体ｐＲＰ２２构建的工程菌株Ｂｓ２２４９具有良好的稳定性，而以载体ｐＢＨ２０１构建的工程菌株Ｂｓ２０１４则不稳定。此外，实验还证实Ｂｔ基因的导入与表达对Ｂ９１６的生长没有不良影响。