兔抗人Cyclin D1b多克隆抗体的制备与鉴定

Preparation and identification of rabbit anti-human Cyclin D1b polyclonal antibody

目的:制备Cyclin D1b蛋白C端多肽的多克隆抗体,为后续Cyclin D1b的研究奠定基础。方法:用生物信息学方法分析Cyclin D1b蛋白的同源性、亲水性和抗原性,设计并合成Cyclin D1b C端的氨基酸序列,将合成后的多肽与钥孔血蓝蛋白(Keyhole-limpet hemocyanin,KLH)偶联并免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。ELISA法检测多抗效价,Western blotting检测Cyclin D1b的表达,免疫组织化学法检测该抗体的特异性与适用范围。结果:成功制备兔抗人Cyclin D1b蛋白C端多肽的多克隆抗体,ELISA法效价为1∶18 000。纯化后的抗体用于Western blotting可特异识别MCF-7细胞中的Cyclin D1b,并可用于免疫组织化学检测。结论:制备成功Cyclin D1b蛋白C端多肽的多克隆抗体,此多抗可用于Western blotting和免疫组织化学等分析。