摘要
目的获得具有较高纯度和酶活性的烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶-1(Nmnat1),为进一步对其功能及调控的研究奠定基础。方法在大肠杆菌中进行Nmnat1表达的条件优化,采用Ni-NTA亲和层析法对目的蛋白进行纯化,并通过酶联荧光法测定酶活性。结果 BL21-CondonPlus (DE3)-RIL为适宜的宿主菌,优化的蛋白表达条件为:在2×YT培养基(37μg/ml氯霉素和75μg/ml卡那霉素)中于28℃、0.5mmol/LIPTG(isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导8h。纯化获得的Nmnat1蛋白具有较高的纯度和酶活性。结论适宜的宿主菌对Nmnat1蛋白的高效表达至关重要,进行表达条件优化后可获得大量具有较高纯度和酶活性的目的蛋白。
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期1251-1254,共4页
Academic Journal of Second Military Medical University
基金
国家重点基础研究发展计划课题("973计划"
2009CB521902)
国家"重大新药创制"科技专项(2009ZX09303-002)
上海市优秀学科带人计划(10XD1405300)
上海市血管生物学重点实验室开放课题基金(GXY2009001001)~~