携带人ILT-3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定

目的:构建携带人ILT3基因重组慢病毒载体并检测其生物学功能。方法:从已构建好的含ILT3的质粒pB lue-scriptR-ILT3为模板,利用聚合酶链反应(PCR)方法扩增目的基因ILT3;将该基因与慢病毒载体表达质粒pLVX-AcGFP-N1连接,得到重组的pLVX-AcGFP-ILT3,通过酶切和测序分析比对验证ILT3基因后,将pLVX-AcGFP-ILT3质粒利用慢病毒转染系统转染人胚胎肾上皮细胞株Lenti-X 293T细胞获得携带ILT3慢病毒载体;转染人脐静脉血管内皮细胞,利用流式细胞仪检测目的基因ILT3的表达。结果:经PCR扩增获得1 844 bp的目的基因片段,构建的重组质粒经酶切及测序和分析比对鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒,纯化、浓缩后滴度达5×1012转导单位pfu/L;转染的HUVECs,流式细胞检测ILT3阳性率为98%,可判断目的基因ILT3在靶细胞HUVECs中表达。结论:成功构建转载质粒pLVX-AcGFP-ILT3及携带ILT3基因慢病毒载体。