HER-2基因打靶对HeLa细胞生长的抑制

构建具有正、负筛选特性的HER-2基因打靶载体,promoter pPNT 1305。用电穿孔法把线性promoter pPNT 1305导入HeLa细胞,经G418正筛选及丙氧鸟苷负筛选,选出敲除了HER-2单等位基因的打靶命中细胞(HER-2^(-1)细胞)。Northern杂交表明,HER-2^(-1)细胞的HER-2 mRNA水平低于HeLa细胞;Western blot结果显示其HER-2蛋白水平下降,亦低于HeLa细胞。流式细胞计分析表明,HER-2单等位基因敲除后,细胞周期时相左移,G1期比例上升,G2+M期比例下降。可见敲除HER-2基因对HeLa细胞生长具有抑制作用。